VALUTAZIONE DI UN NUOVO PROBIOTICO (VSL#3) NEL TRATTAMENTO DELL‘IBD DEL CANE HISTOPATHOLOGICAL EVALUATIONS OF A NEW PROBIOTIC (VSL#3) IN CANINE IBD

Riassunto Si riportano gli effetti clinici, microbiologici, istologici ed immunomodulanti di un probiotico composto da varie specie batteriche (VSL#3, VSL Pharmaceuticals, Inc.), valutati in un gruppo di 10 cani con diagnosi di IBD. I criteri per l’arruolamento dei cani, sintomatici, prevedevano una diagnosi di IBD di vecchia data, con storia clinica di recidive plurime in assenza di qualsiasi trattamento da almeno un mese. I cani ricevevano giornalmente 450 miliardi circa di batteri liofilizzati, per un periodo di 60 giorni. All’inizio e al termine del periodo di trattamento (a T0 e 30 giorni dopo la fine del trattamento -T1-, ovvero 90 giorni dopo il T0) venivano collezionati campioni bioptici, di plasma e fecali. La concentrazione della citrullina plasmatica era quindi misurata tramite spettrofotometria di massa ed il microbioma fecale veniva analizzato tramite pirosequenziamento della sub-unità 16S dell’rRNA seguito da analisi di qPCR, comparando i dati ottenuti dai cani con IBD prima e dopo il trattamento con quelli di 10 cani sani. Sono stati quindi comparati i risultati ottenuti a T0 e a T1 per quanto attiene gli scores istologici, i livelli di espressione di TGF-β, delle cellule CD3 positive e di quelle Fox-p3 positive, nonchè il “clinical activity index” (CIBDAI). Per la comparazione statistica è stato utilizzato il “paired t-tests” o il test Wilcoxon, quando questo era più appropriato. Dopo il trattamento si è osservato un significativo decremento dell’indice CIBDAI (p=0.006), degli score istologici (p<0.001) e dell’infiltrazione linfocitaria CD3+ (p=0.007). Al contrario, la concentrazione plasmatica della citrullina (p=0.013), il TGF-β (p=0.002) e l’espressione dei linfociti Fox-P3+ (p=0.002) è risultata aumentata. Significative differenze sono state infine osservate (Unifrac distance metric; p<0.05) nella composizione del microbiota dei cani sani rispetto ai cani con IBD, sia prima (T0) che dopo il trattamento. Summary Clinical, microbiological, histological, and immunomodulatory effects of VSL#3 (VSL#3, VSL Pharmaceuticals, Inc.), a commercial multi-strain probiotic, were evaluated in a group of 10 IBD affected dogs. Criteria for dogs enrolment were: a long-time diagnosis of IBD, recurrence of clinical signs and absence of any treatment for a month. Dogs received on average 450 billion lyophilized bacteria daily for 60 days. Before and after the treatment (T0 and 30 days after the end of treatment = T1; 90 days after T0), fecal, plasma samples, and biopsies were collected. Plasma citrulline concentrations were measured by mass spectrometry. The fecal microbiota was analyzed by 16S rRNA gene 454-pyrosequencing and qPCR assays, and compared to data obtained from ten healthy pet dogs. Histology scores, the expression of TGF-β, CD3, and Fox-p3 positive cells, and the clinical activity index (CIBDAI) were compared at T0 and T1 using paired t-tests or Wilcoxon matched pairs tests, where appropriate. After treatment, significant decreases were observed for CIBDAI (p=0.006), histology scores (p<0.001), and infiltration with CD3+ T-lymphocytes (p=0.007). In contrast, plasma citrulline concentrations (p=0.013), TGF-β (p=0.002) and Fox-P3 (p=0.002) positive cells increased. Significant differences (Unifrac distance metric; p<0.05) in microbiota composition were observed between the healthy dogs, T0 of the IBD dogs, and IBD dogs after the treatment. Parole Chiave: IBD, Probiotici, microbioma, biopsie intestinali, immunoistochimica Key Words: IBD, Probiotics, microbiome, enteric biopsies, immunohistochemistry